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AGAROSA
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- El bromuro de etidio (BrEt) es un agente intercalante usado comúnmente como aclarador de ácidos nucleicos en laboratorios de biología molecular para procesos como la electroforesis en gel de agarosa.
- Químicamente el agar es un polímero de subunidades de galactosa; en realidad es una mezcla heterogénea de dos clases de polisacáridos: agaropectina y agarosa.
- La agarosa es un polisacárido formado por galactosas alfa y beta que se extrae de las algas de los géneros Gellidium y Gracillaria.
- Se emplea como colorante para la cuantificación de ADN de doble cadena en algunos métodos de PCR cuantitativa o para la visualización del ADN en la electroforesis con geles de agarosa.
- Como medio de soporte se puede usar (de más antiguo a más reciente): papel, acetato de celulosa, agarosa, poliacrilamida y electroforesis capilar.
- Tras la digestión del ADN, los fragmentos de ADN resultantes se separan según su tamaño mediante electroforesis en geles de agarosa.
- Disolución tampón formada por Tris, acetato y EDTA, de uso frecuente en electroforesis, en especial en gel de agarosa para separar ácidos nucleicos.
- Disolución tampón formada por Tris, borato y EDTA, de uso frecuente en electroforesis, en especial en gel de agarosa para separar ácidos nucleicos.
- Los hidrogeles son sistemas en estado coloidal con apariencia sólida como la albúmina coagulada por el calor, la gelatina gelificada por enfriamiento, la agarosa, etc.
- Los complejos de inmunoprecipitación se pueden ver en el mismo gel de agarosa, pero requieren ser teñidos con colorantes para proteínas tales como el Azul Coomassie.
- El ADN se puede cuantificar cortando el ADN con una enzima de restricción, pasándolo por un gel de agarosa, tiñéndolo con bromuro de etidio (EtBr) o con una tinción diferente y comparando la intensidad del ADN con un marcador de ADN de concentración conocida.
- La agaropectina, que compone aproximadamente el 30% del agar, es un polisacárido variado y contiene una estructura similar a la de la agarosa, puesto que también está formada por galactosas alternadas, pero con una alta abundancia de grupos ácidos, como los sulfatos, el ácido D-glucurónico y pequeños porcentajes de ácido pirúvico.
- El bromuro de cianógeno a menudo se usa para inmovilizar proteínas acoplándolas a reactivos como agarosa para la cromatografía de afinidad.
- Falkow y sus becarios desarrollaron muchos métodos que hicieron avanzar la investigación biológica, como: un método para el cribado de muestras de pacientes en busca de patógenos entéricos, la identificación de Salmonella y Shigella en muestras de pacientes basada en el metabolismo de la lisina, la aplicación de la hibridación de ácidos nucleicos para distinguir diferentes especies bacterianas, la aplicación de geles de agarosa para aislar plásmidos de varios tamaños, el aislamiento y la creación de diferentes esqueletos de plásmidos utilizados actualmente como vectores de clonación, un método de identificación de patógenos no cultivables basado en la secuencia aislada del ARN ribosómico 16S, una versión optimizada de la GFP para aplicaciones de citometría de flujo y un método basado en la fluorescencia para la detección de genes expresados por patógenos en el interior de células huésped, entre otras muchas técnicas.
- La agarosa se dispersa en el tampón antes de calentarlo hasta casi el punto de ebullición, pero evitando que hierva.
- La técnica consiste en extraer el ADN de las células, fijarlo en tapones de agarosa y transferirlos al sistema AFIGE.
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